kFluor555-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)实验报告

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

小鼠胰岛素(mouse Insulin)

小鼠抑制素A(mouse Inhibin A)

小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)

小鼠IP-10(mouse IP-10)

小鼠8异前列腺素(mouse 8-iso-PG)

小鼠白三烯B4(mouse LTB4)

小鼠瘦素(mouse Leptin)

小鼠瘦素受体(mouse Leptin receptor)

小鼠促黄体生成激素(mouse LH)

小鼠巨嗜细胞趋化蛋白-1(mouse MCP-1)

小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(mouse MDC)

小鼠髓过氧化物酶(mouse MPO)

小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)

小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)

小鼠巨噬细胞游走抑制因子(mouse MIF)

小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1(mouse MIP-1)

小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-2(mouse MIP-2)

小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3a(mouse MIP-3a)

小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3β(mouse MIP-3β)

小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1a(mouse MIP-1a/CCL3)

小鼠基质金属蛋白酶-1(mouse MMP-1)

小鼠基质金属蛋白酶-2(mouse MMP-2)

小鼠基质金属蛋白酶-3(mouse MMP-3)

小鼠基质金属蛋白酶-9(mouse MMP-9)