咨询热线

13928144929

当前位置:首页  >  技术文章  >  4mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)操作步骤

4mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)操作步骤

更新时间:2023-06-07      点击次数:713

4mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)操作步骤

切取含有目的DNA 片段的琼脂糖凝胶条带。

   ● 尽量切除不含有目的DNA 部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA 回收率。

   ● 切胶时,请使用长波长UV  (360 nm )光盒。且不要将DNA 长时间暴露在紫外灯下,以防DNA 损伤。

2  称取凝胶的重量近似地确定其体积。

   ● 凝胶重量的称量方法:取.5 ml 离心管电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同离心管的重量可能有差异,因此,每个离心管的重量需单独称量。

3  按照每00 mg 琼脂糖凝胶对应00 µl 溶液BD 的比例,向离心管中加入溶液BD。

4  50 ℃水浴7-0min,直至凝胶*溶化。期间需要振荡混合3 次。

   ● 琼脂糖必须*融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA 段的回收效率。

   ● 如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。

   ● 若此时溶液变红,可加0 µl 3M NaAC  (pH 5.2)。

5  将步骤4 所获溶液置于DNA 纯化柱中,静置2min 。

   ● 胶块*溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA  的能力较弱。

6  2,000 rpm 离心min。若溶液量大于DNA 纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。

   ● 此时DNA 被吸附于DNA 纯化柱中的硅胶膜上。

7  加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm,  离心min,弃滤液

8  加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  离心min,弃滤液。

   ● 溶液PE 初次使用前用无水乙醇按: 4 稀释,即含80% 乙醇。

   ● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量DNA 段。

9  加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  离心min,弃滤液。

0 2,000 rpm 离心  3min ,以*去除纯化柱中的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA 段的充分溶解。

  将离心柱置于新的.5 ml 离心管中。向纯化柱的处,悬空滴加30-00 µl 溶液Eluent  (60℃预热),静置2min 。2,000 rpm  离心min,管底即为目的DNA 段。贮存于-20℃。

   ● 溶液Eluent 可用无菌双蒸水代替,但其pH 需为8.0-8.5,加入体积视DNA 目的段的多少、用户对目的浓度要求而定。

   ● 对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA 目的段的产量。

玻璃珠法柱式酵母DNAout

玻璃珠法柱式真菌DNAout

大提柱式酵母DNAout(见关联产品)

大提柱式真菌DNAout

酵母DNAout(见关联产品)

溶壁酶(破壁酶)干粉

蜗牛酶干粉

消解酶(溶细胞酶)干粉

真菌DNAout

柱式真菌DNAout

细胞器DNA提取

丝状真菌线粒体DNAout

线状DNA清除剂

柱式动物线粒体DNAout,PCR级

柱式动物线粒体DNAout,测序级

柱式昆虫mtDNAout,测序级(停产)

柱式血液mtDNAout,测序级(见关联产品)

柱式植物mtDNAout,测序级(见关联产品)

柱式植物叶绿体DNAout

细菌DNA提取

Southern级细菌(G+)DNAout(见关联产品)

Southern级细菌(G-)DNAout(见关联产品)

百万碱基级细菌(G+)DNAout(见关联产品)

百万碱基级细菌(G-)DNAout(见关联产品)

大提柱式土壤DNAout

大提柱式细菌DNAout

大提柱式细菌DNAout


联系我们

上海帛科生物技术有限公司 公司地址:上海嘉定区嘉罗公路1661 号0364栋   技术支持:

扫一扫 更多精彩

微信二维码

网站二维码