​黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤

黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤:

方法

1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。

3结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

人肾小球内皮细胞*培养基

人肾管状上皮细胞*培养基

人肾皮层上皮细胞*培养基

人肾上皮细胞*培养基

人输尿管上皮细胞*培养基

人肾实质细胞*培养基

人肾系膜细胞*培养基

人膀胱上皮细胞*培养基

人膀胱平滑肌细胞*培养基

人肾动脉内皮细胞*培养基

人肾动脉平滑肌细胞*培养基

人肾成纤维细胞*培养基

人膀胱成纤维细胞*培养基

人尿道上皮细胞*培养基

人肾足突细胞*培养基

人心房肌细胞*培养基

人心室肌细胞*培养基

人心肌成纤维细胞*培养基

人心脏微血管内皮细胞*培养基

人主动脉内皮细胞*培养基

人主动脉平滑肌细胞*培养基

人脐静脉内皮细胞*培养基

人脐动脉内皮细胞*培养基

人脐静脉平滑肌细胞*培养基

人脐动脉平滑肌细胞*培养基