1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作注意事项
1、进口elisa试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2、实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3、预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
4、严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5、所有液体组分使用前充分摇匀。
保温方式
1、可将ELISA试板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。
2、为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。
3、若用保温箱,应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,后将ELISA板放在湿纱布上。
4、应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。
5、无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。
6、室温温育的反应,操作时的室温应严格限制在规定的范围内,标准室温温度是指20~25℃,但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。