探针法PCR检测试剂盒的测试原理

　　探针法PCR检测试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。

　　探针法PCR检测试剂盒检测方法的局限性：

　　1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

　　2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

　　3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

　　4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

　　5.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

　　6.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

　　探针法PCR检测试剂盒常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体，亦可用于微环境，如表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等处微观特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移；用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。