详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
腺伴随病毒PCR检测试剂盒规格 | Adenoassociated Virus(AAV)PCR | BK-P8763 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
IMR-32(人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2
SuperPolymer Rabbit&Mouse HRP Kit/Super Polymer-二步法IHC试剂盒3ml、18ml国产
杆菌属 Lactobacillus sp.烬灰链霉菌 Streptomyces cinereogriseus
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae酸球菌 Lactococcus lactis
亚酸胱氨酸增菌/SC增菌/SC肉汤/Selenite Cystine Broth沙门氏菌选择性增菌培养250克国产/进口
大鼠肝细胞瘤细胞英文名称:H-4-II-E
SDS-PAGE Loading Buffer (非还原,5x)10ml国产
日本霉 Rhizopus japonicusII型胶原酶(含100mL酶解缓冲)
钠蔗糖琼脂/Sodium Chloride Sucrose Agar副溶血性弧菌的选择性分离培养250克国产/进口
香菇 Lentinula edodes酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
小鼠前脂肪细胞*培养基100mL
腺伴随病毒PCR检测试剂盒规格氯唑H Black BH 830.71分子量: C32H21N6Na3O11S3*:2429-73-4
4-氯喹唑啉 164.59 4- chloroquine cefazolin*:5190-68-1分子量: C8H5ClN2
2-(3-(4,4,5,5-四甲-l-1,3,2-dioxaborolan-2-)-1--1氢并咪唑 2- (3- (4,4,5,5- four - l-1,3,2-dioxaborolan-2- methyl -1- phenyl) phenyl benzimidazole hydrogen -1*:952514-86-2分子量:
2-甲氧-4-吡甲醛 2-, -4-, formaldehyde*:72716-87-1分子量:
2-氯-5-甲-3-硝吡 172.57 2- -5- -3- nitro pyridine*:23056-40-8分子量: C6H5ClN2O2
分散兰1 Disperse blue 1 268.27分子量: C14H12N4O2*:2475-45-8
4-羟甲-4'-甲-2,2'-联吡 200.24 4-, -4'-, -2,2'-*:81998-04-1分子量: C12H12N2O
4-甲-5-甲酰噻唑 127.16 4- -5- benzoyl methyl thiazole*:82294-70-0分子量: C5H5NOS
邻硝三氟甲 191.11 Ortho nitro three f*:384-22-5分子量: C7H4F3NO2
过氧羟异丙 152.19 Cumene hydroperoxide*:80-15-9分子量: C9H12O2
3-乙酰-2-溴吡 200.03 3- acetyl -2-*:84199-61-1分子量: C7H6BrNO
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