内氏放线菌PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

异佛手柑内酯 CAS 482-48-4 *  规格： 20mg

1-脱氧野尻 CAS 19130-96-2 *  规格： 20mg

苯噻啶 CAS 15574-96-6 *  规格： 50mg

豆蔻酸 CAS 544-63-8 *  规格： 20mg

红花 CAS  *  规格： 0.5g

毕灵碱 CAS 485-49-4 *  规格： 20mg

2-单异山梨酯 CAS 16051-77-7 *  规格： 50mg

耐斯糖 CAS  *  规格： 20mg

醋酸奥曲肽 CAS  *  规格： 20mg/支

环己 CAS  *  规格： 0.2ml

通关藤苷H CAS  *  规格： 20mg

棘膏 CAS  *  规格： 0.5g

头孢克肟 CAS 79350-37-1 *  规格： 100mg

头孢呋辛酯 CAS 64544-07-6 *  规格： 200mg

胸腺五肽 CAS  *  规格： 50mg/支

内氏放线菌PCR检测试剂盒说明书小鼠结缔组织纤维细胞  LTK

月桂基硫酸盐胰蛋白胨MUG培养基/月桂基硫酸盐胰蛋白胨4-伞形酮葡糖苷酸培养基/LST-MUG Medium大肠杆菌O157检测250克国产/进口

气单胞菌培养基添加剂/Ampicillin Selective Supplement加入100ml气单胞菌培养基基础10支国产/进口

肝素抗凝管5毫升国产/进口

M-TGE汤/M-TGE Broth奶制品中滤膜细菌计数250克国产/进口

人腺成纤维细胞*培养基100mL

大鼠肾小管上皮细胞*培养基100mL

透明质酸酶(含100mL酶解缓冲液)10mL

改良月桂基硫酸盐胰蛋白月示汤(MLST) 规格： 250g 用途： 用于奶粉中阪崎肠杆菌的检验的增菌和分子生物学检验方法（PCR）选择性增菌

碳酸酐酶Ⅱ(CA2)天然蛋白   Native Carbonic Anhydrase II (CA2)

层粘连蛋白β1(LAMβ1)重组蛋白  Recombinant Laminin Beta 1 (LAMb1)

基质金属蛋白酶3(MMP3)重组蛋白  Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)

神经营养因子3(NT3)重组蛋白  Recombinant Neurotrophin 3 (NT3)

增殖关联蛋白2G4(PA2G4)重组蛋白  Recombinant Proliferation Associated Protein 2G4 (PA2G4)

HUVEC(HUV-EC-C) (人脐静脉血管内皮细胞)5×106cells/瓶×2

SW1116(人结肠腺细胞)5×106cells/瓶×2

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。