详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
牛疱疹病毒型PCR检测试剂盒厂家 | Bovine Hepervirus 1 (BHV1)1PCR | BK-P8909 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
毛萼结甲(95%) CAS * 规格: 20mg
葫芦素D CAS 3877-86-9 * 规格: 10mg
山茱萸 CAS * 规格: 1g
异鼠李素-3-O—新橙皮苷 CAS * 规格: 10mg
千层纸素A CAS 480-11-5 * 规格: 20mg
木瓜对照药材 CAS * 规格: 1g
3-O-没食子酰粘酸 CAS * 规格: 10mg
6-姜酚 CAS 23513-14-6 * 规格: 20mg
桂醛 CAS 104-55-2 * 规格: 20mg
柯皂苷元(95%) CAS 467-55-0 * 规格: 20mg
3,4,5-三 CAS 1916-07-0 * 规格: 20mg
肥皂草素(UV98%) CAS 8047-15-2 * 规格: 20mg
京平苷酸 CAS 27741-01-1 * 规格: 20mg
1,5-O-二啡酰奎宁酸 CAS 30964-13-7? * 规格: 20mg
人参皂苷Rh1 CAS 63223-86-9 * 规格: 20mg
牛疱疹病毒型PCR检测试剂盒厂家银杏内酯A Ginkgo biloba A 408.39916分子量:C20H24O9*:15291-75-5
环吡司胺 Ciclopiroxolamine 268.35分子量: C14H24N2O3*:41621-49-2
啡啉 Morpholin 87.12分子量: C4H9NO*:110-91-8
5--2,2-二氟-1,3-并二噁唑 173.12 5- -2,2- two -1,3- fluorine amino benzene and two oxazole*:1544-85-0分子量: C7H5F2NO2
4-溴-4'-联 359 4- -4'- iodide*:105946-82-5分子量: C12H8BrI
3-溴苄 215.05 3- bromide*:39115-96-3分子量: C7H7BrN2O
穿心莲内酯 Andrographolide 350.4492分子量:C20H30O5*:5508-58-7
酚硫杀 Phenol sulfur 244.74分子量:C11H13ClO2S*:25319-90-8
四水合乙酸钴 249.08 Four hydrated cobalt acetate*:6147-53-1分子量: C4H6CoO4·4H2O; Co(CH3COO)2
猪去氧胆 Hyodeoxycholic Acid 392.57分子量:C24H40O4*:83-49-8
吲唑 118.14 Indazole*:271-44-3分子量: C7H6N2
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