详细介绍
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
牛鼻炎病毒通用PCR检测试剂盒厂家 | Bovine Rhinitis Virus (BRV) RTPCR | BK-P8921 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
7-表-10-去乙酰基紫杉醇;Deace CAS 78432-77-6 * 规格: 20mg
蝙蝠葛苏林碱;daurisoline CAS 70553-76-3 * 规格: 20mg
阿魏酸钠;Sodium ferulic CAS 24276-84-4 * 规格: 20mg
草铵膦;纯品型;标准品;有证书 CAS 77182-82-2 * 规格: 0.1g
特草定;纯品型;标准品;有证书 CAS 5902-51-2 * 规格: 0.1g
磺隆;纯品型;标准品;有证书 CAS 79277-27-3 * 规格: 0.1g
嘧菌酯;纯品型;标准品;有证书 CAS 131860-33-8 * 规格: 0.1g
克菌丹;纯品型;标准品;有证书 CAS 133-06-2 * 规格: 0.1g
四螨嗪;纯品型;标准品;有证书 CAS 74115-24-5 * 规格: 0.1g
生物烯丙;纯品型;标准品;有证书 CAS 28434-00-6 * 规格: 0.1g
抑菌灵;纯品型;标准品;有证书 CAS 1 * 规格: 0.1g
阿维菌素;纯品型;标准品;有证书 CAS 71751-41-2 * 规格: 0.1g
对羟基-对照品;有报告 CAS 123-08-0 * 规格: 50mg
木糖;纯品型;标准品;有证书 CAS 58-86-6 * 规格: 0.25g
正十六烷;纯品型;标准品;有证书 CAS 544-76-3 * 规格: 0.1g
牛鼻炎病毒通用PCR检测试剂盒厂家对二溴 235.91 On the two bromobenzene*:106-37-6分子量: C6H4Br2
对二苄氧 290.36 On two benzyl oxygen group*:621-91-0分子量: C20H18O2
2-[4-(3-氯-5-三氟甲-2-吡氧)氧]丙甲酯 2-[4- (3-, three, -5-,, f), benzyl chloride, methyl ester, methyl ester 375.73分子量: C16H13ClF3NO4*:69806-40-2
吡氟氯禾灵 Fluorine and chlorine 361.7分子量: C15H11ClF3NO4*:69806-34-4
大黄素甲 Emodin methyl ether 284.26348分子量:C16H12O5*:521-61-9
性品红6B Fuchsin Acid 6B 872.8271分子量: C40H34N4Na2O12*:4321-69-1
松脂二葡萄糖苷 Two pinoresinol glucoside 682.66628分子量:C32H42O16*:63902-38-5
2-羟-6-甲氧喹喔啉 176.17 2- hydroxy -6- methoxy quinoxaline*:91192-32-4分子量: C9H8N2O2
1-Boc-4-亚甲 197.27 1-Boc-4- methylene piperidine*:159635-49-1分子量: C11H19NO2
1-溴-3,5-二巯 221.13 1- -3,5- two mercapto bromide*:1219501-75-3分子量: C6H5BrS2
2--4-甲氧并噻唑 180.23 2- 4 -甲氧并噻唑*:5464-79-9分子量: C8H8N2OS
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