详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
牛轮状病毒通用PCR检测试剂盒规格 | Bovine Rotavirus(BRAV)RTPCR | BK-P8923 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
泊苷 CAS 33419-42-0 * 规格: 20mg
胡黄连苷III CAS C25H30O13 * 规格: 10mg
左旋碱 CAS 541-15-1 * 规格: 20mg
琥酯 CAS 88495-63-0 * 规格: 20mg
朝藿定C CAS 110642-44-9 * 规格: 20mg
当归对照药材 CAS * 规格: 1g
罗汉果苷ⅴ CAS 88901-36-4 * 规格: 20mg
三聚胺 CAS 108-78-1 * 规格: 200mg
番泻苷C CAS 37271-16-2 * 规格: 10mg
芝素 CAS 607-80-7 * 规格: 20mg
吡罗昔康 CAS * 规格: 100mg
滨蒿内酯 CAS 120-08-1 * 规格: 20mg
阿苯唑 CAS 54965-21-8 * 规格: 100mg
氨溴索 CAS 23828-92-4 * 规格: 100mg
双嘧莫 CAS * 规格: 50mg
牛轮状病毒通用PCR检测试剂盒规格CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPβ)重组蛋白 Recombinant CCAAT/Enhancer Binding Protein Beta (CEBPb)
催素诱导蛋白(PIP)重组蛋白 Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)
多巴1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)
嗜铬蛋白A(CHGA)重组蛋白 Recombinant Chromogranin A (CHGA)
脂蛋白脂酶(LIPD)重组蛋白 Recombinant Lipase, Lipoprotein (LIPD)
LLC-MK2(恒河猴肾细胞)5×106cells/瓶×2
BNL 1ME A.7R.1(小鼠肝上皮细胞)5×106cells/瓶×2
人原位胰腺腺细胞 BxPC-3
非洲爪蟾胚胎细胞 ACTE1
小鼠畸胎瘤细胞 Pcc4
特级胎牛血清/Fetal bovine serum(Defined FBS)BR100/500毫升国产/进口
赖氨酸铁琼脂/LIA琼脂/Lysine Iron Agar食品中沙门氏菌生化试验250克国产/进口
WILKINS-CHALGREN琼脂/WILKINS-CHALGREN厌氧菌琼脂/WILKINS-CHALGREN Agar厌氧菌的分离培养250克国产/进口
50%卵黄盐水/50%卵黄液/50% Egg-Yolk Solution卵黄钠琼脂或卵黄琼脂或甘露醇卵黄多粘菌素琼脂的配套试剂50毫升国产/进口
人小脑颗粒细胞*培养基100mL
小鼠小肠粘膜上皮细胞*培养基100mL
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