牛腺病毒通用PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

相思;L-Abrine CAS 526-31-8 *  规格： 20mg

乌药环;Linderone CAS 1782-79-2 *  规格： 20mg

麝香;Musk ketone CAS 81-14-1 *  规格： 20mg

似梨木双黄;Ochnaflavone7 CAS  *  规格：

山柰酚-3-O-芸香糖苷;Kaempfe CAS 17650-84-9 *  规格： 10mg

杨酸甲酯;Birch-Me CAS 119-36-8 *  规格： 1ml

人参皂苷-Rf;Ginseside CAS 52286-58-5 *  规格： 10mg

去甲乌药碱;Higenamine CAS 5843-65-2 *  规格： 20mg

去甲异波尔定;Laurolitsine CAS 5890-18-6 *  规格： 20mg

欧前胡素;Imperatorin CAS 482-44-0 *  规格： 20mg

麦冬皂苷B;Ophiopogonin B CAS 38971-41-4 *  规格： 20mg

蒙花苷;Linarin CAS 480-36-4 *  规格： 20mg

罗汉松树脂酚 ;Matairesil CAS 580-72-3 *  规格： 20mg

落新妇苷;Astilbin CAS 29838-67-3 *  规格： 20mg

肌苷;Isine CAS 58-63-9 *  规格： 50mg

牛腺病毒通用PCR检测试剂盒说明书2-氯-3,5-二硝三氟甲  270.55  2- -3,5- two nitro three f*：392-95-0分子量： C7H2ClF3N2O4

间氟吡  97.09  Fluorine pyridine*：372-47-4分子量： C5H4FN

5-喹啉  144.17  5- amino group*：611-34-7分子量： C9H8N2

二环丙酮  Two phenyl ring  206.24分子量： C15H10O*：886-38-4

乙龙脑酯  Bornyl acetate  196.29分子量：C12H20O2*：20347-65-3

玫瑰红钠  Rose red  214.04分子量： C6Na2O6*：523-21-7

豆素498  498  319.38分子量： C16H17NO4S*：87331-48-4

1,3-二亚胺异吲哚  145.17  1,3- two - based*：57500-34-2分子量： C8H7N3

腈  Benzene acetonitrile  117.15分子量： C8H7N*：140-29-4

重氮胺  197.24  Heavy nitrogen amino group*：136-35-6分子量： C12H11N3

1,2,3-*氧  168.19  1,2,3- grade three*：634-36-6分子量： C9H12O3

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。