详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒规格 | California Encephalitis VirusRTPCR | BK-P8947 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
人尿道上皮细胞*培养基刺孢吸水链霉菌北京变种 Streptomyces hygrospinosus
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum猴菌
NAC琼脂培养基/NAC Agar Medium假单胞菌属分离培养100克国产/进口
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae293T/胚肾细胞
紫色链霉菌 Streptomyces violaceus三叶草瘤菌 Rhizobium trifolii
小鼠胚胎成纤维细胞英文名称:PA317
大鼠肾系膜细胞*培养基100mL
MDA-MB-157(人腺细胞)葡萄球菌属 Staphylococcus sp
杆菌属 Lactobacillus sp.
非洲爪蟾胚胎细胞英文名称:ACTE1
ECV-304(人脐静脉内皮细胞)5×106cells/瓶×2
加利福利亚脑炎病毒PCR检测试剂盒规格二并噻吩砜 216.26 Two benzene and thiophene*:1016-05-3分子量: C12H8O2S
3-羟吡-N-氧物 111.1 3- hydroxy pyridine -N- oxide*:6602-28-4分子量: C5H5NO2
2-溴-3-氯三氟甲 259.45 2- -3- three f*:384-16-7分子量: C7H3BrClF3
1-(4-羟甲)咪唑 174.2 1- (4-)*:86718-08-3分子量: C10H10N2O
3,4-二氟溴 192.99 3,4- two fluorine bromine*:348-61-8分子量: C6H3BrF2
偶氮氯膦 Azo chloride C16H11ClN2NaO11PS2·3分子量:85561-96-2*:85561-96-2
乙溴吡 188.07 Ethyl bromide*:1906-79-2分子量: C7H10BrN
六氟 186.05 Six -*:392-56-3分子量: C6F6
过一硫酸氢钾 614.74 Potassium monopersulfate*:分子量:2KHS05 · KHS04 · K 2S0
1-溴-3-乙 185.06 1- -3- ethyl benzene*:2725-82-8分子量: C8H9Br
氯磷二异丙酯 Two isopropyl chloride phosphate 200.6分子量: C6H14ClO3P*:2574-25-6
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