异尖线虫属PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

莪术醇 CAS  *  规格： 100mg

* CAS 58-38-8 *  规格： 100mg

生长激素 CAS  *  规格： 0.61ug

人瘤病L1基因分型参考品 CAS  *  规格： 100ul/管，30管/套

荜茇 CAS  *  规格： 1g

* CAS 1229-29-4 *  规格： 100mg

阿莫林 CAS 26787-78-0 *  规格： 100mg

维生素E CAS 14638-18-7 *  规格： 200mg

蒲公英 CAS  *  规格： 0.5g

甘草苷 CAS 551-15-5 *  规格： 20mg

熊果酸 CAS 77-52-1 *  规格： 20mg

藁本内酯 CAS  *  规格： 约0.1mL

四环素 CAS  *  规格： 200mg

* CAS 20977-05-3 *  规格： HPLC≥98%,20mg/支

白桦脂醛 CAS 13159-28-9 *  规格： HPLC≥98%,20mg/支

异尖线虫属PCR检测试剂盒说明书2-溴-5-吡  173.01  2- -5- amino pyridine*：13534-97-9分子量： C5H5BrN2

对氯  238.45  The chlorine iodobenzene*：637-87-6分子量： C6H4ClI

4-叔丁邻二甲腈  184.24  4- tert butyl phthalate two*：32703-80-3分子量： C12H12N2

溶剂橙2  Solvent Orange 2  262.31分子量： C17H14N2O*：2646-17-5

磺阿曲库铵  Benzene sulfonic acid  1243.48分子量： C65H82N2O18S2*：64228-81-5

草查尔酮A  Grass chalcone A  338.39698分子量：C21H22O4*：58749-22-7

间氧甲  184.23  Benzene oxygen group*：3586-14-9分子量： C13H12O

*  Gourd  分子量：*：7257-29-6

4'-溴-α,α,α''-三吡  312.17  4'- bromo alpha, alpha, alpha three''- pyridine*：149817-62-9分子量： C15H10BrN3

8-甲氧-2-甲喹啉  173.22  8- methyl group -2-*：3033-80-5分子量： C11H11NO

9-(4-乙炔)咔唑  267.33  9- (4- phenyl acetylene) carbazole*：262861-81-4分子量： C20H13N

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。