详细介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
赭曲霉PCR检测试剂盒价格 | Aspergillus ochraceusPCR | BK-P8806 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
尿苷;Uridine CAS 58-96-8 * 规格: 50mg
毛兰素;Phel CAS 95041-90-0 * 规格: 20mg
2”-O-没食子酰基金丝桃苷;2”-O- CAS 53209-27-1 * 规格: 20mg
路路通酸;Liquidambaric a CAS 4481-62-3 * 规格: 20mg
1-啡酰奎宁酸;1-Caffeoylq CAS 1241-87-8 * 规格: 20mg
焦袂康酸;3-hydroxy-4H-py CAS 496-63-9 * 规格: 20mg
绞股蓝皂苷;Gystemma Pen CAS 15588-68-8 * 规格: 20mg
槐角苷;Sophoricoside CAS 152-95-4 * 规格: 20mg
高黄芩素;Scutellartln CAS 529-53-3 * 规格: 20mg
佛司可林;Forskolin CAS 66575-29-9 * 规格: 20mg
二氢醉椒素;dihydrokavain CAS 587-63-3 * 规格: 10mg
对羟基息香醛;p-Hydroxyben CAS 123-08-0 * 规格: 20mg
地肤子皂苷Ic;Momordin Ic CAS 96990-18-0 * 规格: 20mg
朝藿定A1;Epimedin A1 CAS 140147-77-9 * 规格: 20mg
橙皮素;Hesperetin CAS 520-33-2 * 规格: 20mg
赭曲霉PCR检测试剂盒价格二十七 Twenty-seven acid 410.72分子量: C27H54O2*:7138-40-1
1,2-二溴-4-氟代 253.89 1,2- dibromo -4- fluorobenzoic*:2369-37-1分子量: C6H3Br2F
乙酰丙酮锰 352.26 Manganese dioxide*:14284-89-0分子量: C15H21MnO6
5-喹哪 158.2 5- amino group*:54408-50-3分子量: C10H10N2
4--6-羟嘧 111.1 4- amino -6- hydroxy*:1193-22-2分子量: C4H5N3O
2-(2--5-溴-甲酰)吡 277.12 2- (2- amino group -5-*:1563-56-0分子量: C12H9BrN2O
细胞染色剂黄绿素-AM Cell stain calcein -AM 994.857分子量: C46H46N2O23*:148504-34-1
性红73 Acid red 73 556.48分子量: C22H14N4Na2O7S2*:5413-75-2
性红1 Acid red 1 509.42分子量: C18H13N3Na2O8S2*:3734-67-6
莲心碱 Lian Xinjian 610.74分子量: C37H42N2O6*:2586-96-1
3--2-氯-6-三氟甲吡 196.56 3- amino -2- -6- three*:117519-09-2分子量: C6H4ClF3N2
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
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