禽类肉瘤病毒PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

脱氧胆酸（牛或兔）/去氧胆酸/3α，12α-二羟-5β-胆烷酸/Deoxycholic acidBR，99%，10/100/500克国产/进口

牛津琼脂基础 规格： 100g 用途： 用于单核增生李斯特氏菌的选择性分离(SN0184-2005)。

酸球菌 Lactococcus lactis中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

大鼠关节软骨细胞*培养基酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

CaES-17(人食管细胞)5×106cells/瓶×2

BDS培养基/BDS Medium拟杆菌的分离培养250克国产/进口

小鼠肠粘膜上皮细胞*培养基SW 780(人膀胱移行细胞)

RAG(小鼠肾腺细胞)CNE1, 人鼻咽细胞系

中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii少霉 Rhizopus arrhizus

杆菌属 Lactobacillus sp.豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum

NIH3T3全细胞裂解大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

禽类肉瘤病毒PCR检测试剂盒说明书对甲氧偶氮  212.25  On methoxyazobenzene*：2396-60-3分子量： C13H12N2O

407有机载体  407 organic carrier  分子量：*：

2-氯-4-氟甲  144.57  2- -4- fluoride*：452-73-3分子量： C7H6ClF

4-咪唑  151.21  Imidazole 4- piperidine*：147081-85-4分子量： C8H13N3

氯[1,3-双(2,6-二异丙)咪唑-2-亚]铜(I)  487.59  氯[ 1,3 -双（2,6-二异丙）咪唑- 2 -亚]铜（我）*：578743-87-0分子量： C27H36ClCuN2

环己  160.26  Cyclohexyl benzene*：827-52-1分子量： C6H5C6H11

3-(三氟甲)吡  147.1  3- (three f) pyridine*：3796-23-4分子量： C6H4F3N

百部提取物  Hundreds of extracts  分子量：*：

环己氯镁  Cyclohexyl chloride  142.91分子量： C6H11ClMg*：931-51-1

氘代芘  Deuterium substituted pyrene  212.31分子量： C16D10*：1718-52-1

精吡氟禾草灵  Fluazifop-p-butyl  383.36分子量： C19H20F3NO4*：79241-46-6

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。