4T1（小鼠乳腺癌细胞）

产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

培养：
1.取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用弯头眼科镊取出脾脏，置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次，并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中，脾脏置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。
实验事项：
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

牛津琼脂（OXA）平板（9cm） Oxford Agar Base 3224个/包

PALCAM琼脂平板（9cm） PALCAM Agar 3224个/包

MRS琼脂平板（9cm） MRS Agar 3224个/包

TCBS琼脂平板（9cm） Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 3224个/包

庆大霉素琼脂平板（9cm） Gentamycin Agar 3224个/包

BCYE琼脂平板（9cm） BCYE Agar Base 3224个/包

GVPC琼脂平板（9cm） GVPC Agar Base 3224个/包

我妻氏血琼脂平板（9cm） Wagstsuma Blood Agar Base 3224个/包

NA平板（加青霉素酶）（9cm） Nutrient Agar 3224个/包

CIN-1琼脂平板（9cm） CIN-1 Agar 3224个/包

含青霉素酶TSA培养基平板（7cm） Tryptose Soya Agar 3224个/包

含青霉素酶接触皿培养基平板（5.5cm） Contact Plate Medium 3224个/包

TSA培养基平板（9cm） TSA 3224个/包

RODAC培养皿（TSA）（55mm） RODAC 3224个/包

4T1(小鼠乳腺癌细胞)肿瘤坏死因子配体超家族成员9(TNFSF9)elisa检测试剂盒 英文名称 ：TNFSF9 ELISA Kit，英文缩写：TNFSF9，

脂肪酶J(LIPJ)elisa检测试剂盒 英文名称 ：LIPJ ELISA Kit，英文缩写：LIPJ，

粘蛋白7(MUC7)elisa检测试剂盒 英文名称 ：MUC7 ELISA Kit，英文缩写：MUC7，

运动因子相关蛋白1(MRP1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：MRP1 ELISA Kit，英文缩写：MRP1，

原钙黏素12(PCDH12)elisa检测试剂盒 英文名称 ：PCDH12 ELISA Kit，英文缩写：PCDH12，

乙醇脱氢酶4(ADH4)elisa检测试剂盒 英文名称 ：ADH4 ELISA Kit，英文缩写：ADH4，

岩藻糖基转移酶7(FUT7)elisa检测试剂盒 英文名称 ：FUT7 ELISA Kit，英文缩写：FUT7，

血小板亲和蛋白4(PKP4)elisa检测试剂盒 英文名称 ：PKP4 ELISA Kit，英文缩写：PKP4，

血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)elisa检测试剂盒 英文名称 ：VEGFR2 ELISA Kit，英文缩写：VEGFR2，

形成素2(FMN2)elisa检测试剂盒 英文名称 ：FMN2 ELISA Kit，英文缩写：FMN2，

小脑肽2(CBLN2)elisa检测试剂盒 英文名称 ：CBLN2 ELISA Kit，英文缩写：CBLN2，

酰基甘油激酶(AGK)elisa检测试剂盒 英文名称 ：AGK ELISA Kit，英文缩写：AGK，

细胞因子受体样因子1(CRLF1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：CRLF1 ELISA Kit，英文缩写：CRLF1，

无脉络膜蛋白(CHM)elisa检测试剂盒 英文名称 ：CHM ELISA Kit，英文缩写：CHM，

操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于19个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。