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实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:甜菜碱含量测试盒可见分光光度法
产品规格:50管/48样
检测方法:可见分光光度法
产品货号:BK-01S6934
产品分类:其它系列
商品介绍:
测定意义: 甜菜碱是一种广泛分布于动植物及微生物体内的季铵型水溶性生物碱,是生物体内的氧化产物,可以增强免疫力、降血脂、抗氧化、抗肿瘤,并可作为甲基供体,参与促进动物蛋白质和脂肪代谢、增进食欲、缓和应激、调节渗透压、稳定维生素等多种生物作用,在化工、医药、食品添加剂等领域有较广泛的应用。 测定原理 甜菜碱在强酸条件下和雷氏盐发生反应产生沉淀,沉淀用丙酮溶解形成红色溶液,在525nm处有特征吸收峰,测定525nm处的吸光值,可得样品的甜菜碱含量。 自备实验用品及仪器 天平、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、甲醇、、盐酸和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
酪蛋白葡萄糖肉汤 Sabouraud-dextrose Broth 250g
1g 对钠盐 p-Nitrophenylphosphate Disodium Salt Hexahydrate(p-NPP) -20℃保存
我妻氏基础 Wagstsuma Agar Base 250g
5 mg JC-10 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
50mL Calcium Chloride Solution(氯化钙溶液), 1M Calcium Chloride Solution, 1M 常温保存
50次 柱式OLIGO回收试剂盒 Column OLIGOBACK 4℃保存
2 ug pGL4.28[luc2CP/minP/Hygro] pGL4.28[luc2CP/minP/Hygro] 低温运输,-20℃保存
改良罗氏基础 L-G medium Base,Modified 250g
1瓶 hFOB 1.19细胞株 hFOB 1.19 低温运输和保存
胰酪胨大肉汤 Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 10ml/支*20
250mg Pepsin 4℃保存
甜菜碱含量测试盒可见分光光度法Mouse Anti-human IgG/Cy5 Cy5标记的小鼠抗人IgG 规格: 0.1ml
FAF1 Fas相关1因子抗体 规格: 0.1ml
phospho-PLB(Ser16) 磷酸化心脏磷蛋白抗体 0.1ml
ERCC6L 发育相关蛋白ERCC6L抗体(乙醇致畸因子) 规格: 0.2ml
RAD54B DNA修复和重组蛋白RAD54B抗体 规格: 0.2ml
CD45RO CD45RO抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.1ml
S100A6BP/CACYBP 钙周期素结合蛋白抗体 规格: 0.2ml
BTBD19 BTB/POZ结构域蛋白19抗体 规格: 0.2ml
phospho-ER-beta(ser87) 磷酸化雌激素受体β抗体 规格: 0.1ml
HRG Beta1 Heregulin β蛋白抗体 规格: 0.1ml
DBC1/deleted in bladder cancer 1 膀胱缺失基因1 规格: 0.2ml
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