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实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:土壤羟胺还原酶(HR)测试盒微量法
产品规格:100管/48样
检测方法:微量法
产品货号:BK-01S6870
产品分类:土壤系列
商品介绍:
测定意义: 土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨,土壤中的还原态化合物可作为氢的供体,其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失,间接影响氮肥的利用效率。 测定原理 硫酸铁铵中的Fe3+可将羟胺氧化为氮气,自身被还原为Fe2+,Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物,在510nm处有吸收峰,羟胺还原酶作用于羟胺,使配合物形成量减少,510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。 自备实验用品及仪器 天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪、氮吹仪。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
2 ug pLVPT-GDNF-rtTR-KRAB-2SM2 pLVPT-GDNF-rtTR-KRAB-2SM2 低温运输,-20℃保存
葡萄糖天门冬素 Glucose Asparagine Medium 250g
1瓶 NCI-H520细胞株 NCI-H520 低温运输和保存
双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST) 250g
25g 钠 Barbital Sodium 室温保存
50T 阪崎肠杆菌rpsU-dnaG 基因间序列(78bp)常规PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
100mL Bradford法蛋白定量试剂盒 Bradford Protein Assay Kit 常温保存,BSA标准需要-20℃保存
2 ug pTRE-Tight-BI pTRE-Tight-BI 低温运输,-20℃保存
200次 柱式血液DNAout Column Blood DNAOUT 常温
2 ug pECFP- ER pECFP- ER 低温运输,-20℃保存
CIN-1琼脂平板9cm Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar 24个/包
土壤羟胺还原酶(HR)测试盒微量法OGFOD1 末端多聚苷酸1蛋白抗体 规格: 0.2ml
KCND1/Kv4.1 电压门控钾通道Kv4.1抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Gold 胶体金标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.5ml
AT1R/AGTR1 管紧张素Ⅱ-1型受体抗体 规格: 0.1ml
CCNYL1 周期素样Y1抗体 规格: 0.2ml
Quiescin Q6/QSOX1 巯基氧化1抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根过氧化物标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.1ml
DIRC2 干扰细胞蛋白2抗体 规格: 0.2ml
Thymidylate synthase/TS 胸苷酸合成抗体 规格: 0.1ml
IHH HHG2抗体 规格: 0.2ml
phospho-DDX58 (Ser8) 磷酸化DDX58抗体 规格: 0.1ml
Azurocidin/Cationic antimicrobial protein 37 肝素结合蛋白/阳离子抗菌蛋白37/天青杀素抗体 规格: 0.2ml
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