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实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:几丁质酶测试盒可见分光光度法
产品规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
产品货号:BK-01S6752
产品分类:糖代谢系列
商品介绍:
测定意义: 几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。 测定原理: 几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与DNS试剂反应产生棕红色化合物,在540nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。 自备实验用品及仪器 天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、1 mL玻璃比色皿/96孔板、甲苯(土壤样品专用)和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
1g 潮 B Hygromycin B 4℃保存
50T 蓝舌病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
5mL 成纤维细胞生长因子-2 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
25mL Agarose Gel Loading Buffer-Glycero (甘油型上样液),6X Agarose Gel Loading Buffer-Glycero ,6X 常温保存
10mL DNA上样液 (红色),6×(非甘油) DNAON 4℃保存
2 ug pGL4.17[luc2/Neo] pGL4.17[luc2/Neo] 低温运输,-20℃保存
抗生素检定培养基1号(低pH) AntibioticAgar 250g
1瓶 CRT细胞株 CRT 低温运输和保存
TCBS琼脂平板(9cm) Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 96个/包
100mg 辣根过氧化物,偶联级 Horseradish Peroxidase,Conjugation Grade -20℃保存
250mL PIPES Buffer,1.0M, pH6.8 PIPES Buffer,1.0M, pH6.8 常温保存
几丁质酶测试盒可见分光光度法UGP2 尿苷酰二磷酸葡萄糖焦磷化2抗体 规格: 0.2ml
P4HB 蛋白二硫键异构P4HB抗体 规格: 0.2ml
MPP9/MPHOSPH9 有丝分裂细胞周期蛋白MPP9抗体 规格: 0.2ml
Inhibin Beta C 抑制素βC抗体 规格: 0.2ml
phospho-CDK6 (Tyr13) 磷酸化周期素依赖性激6抗体 规格: 0.1ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy3 Cy3标记的小鼠抗兔IgM 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗羊IgG 规格: 0.1ml
SRF/SAP2/MCM1 生激素释放因子抗体(清应答因子) 规格: 0.2ml
PDC6I/Alix 调亡诱导因子6相互作用蛋白/多巴胺受体相互作用蛋白4抗体 规格: 0.2ml
CDKN1C/p57 Kip2 周期蛋白依赖激抑制因子1C抗体 规格: 0.1mlMrpL39 线粒体核糖体蛋白L39 规格: 0.1ml
Nav1.5/SCN5A 电压门控钠通道5α抗体 规格: 0.2mlInvolucrin 囊包蛋白/内披蛋白抗体 0.2ml
PDGFRA 小板源性生因子受体A抗体(PDGFRα) 规格: 0.1mlPhospho-MYPT1(Thr696) 磷酸化肌球蛋酸抗体 规格: 0.1ml
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