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注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:海藻糖酶测试盒可见分光光度法
产品规格:50管/24样
检测方法:可见分光光度法
产品货号:BK-01S6718
产品分类:海藻糖系列
商品介绍:
测定意义: THL(EC 3.2.1.28)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。 测定原理: 采用3.5-二硝基水杨酸法测定THL催化海藻糖产生的还原糖的含量。还原糖与3.5-二硝基水杨酸共热生成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比,由此判断THL活性的高低。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
1瓶 RWPE-1细胞株 RWPE-1 低温运输和保存
改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基(mTSB) 250g
25mL 快流速 DEAE- 琼脂糖凝胶 DEAE-Sepharose Fast Flow 4℃保存
50T 传染性脓疱病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
50L Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(干粉) Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer 常温保存
2 ug pYES2NT/C pYES2NT/C 低温运输,-20℃保存
4次 大提柱式土壤DNAout Maxi Column Soil DNAOUT 常温
250mL Sodium Citrate Buffer(柠檬酸钠缓冲液),0.5M, pH5.0 Sodium Citrate Buffer,0.5M, pH5.0 常温保存
柠檬酸铁铵(0.05g/支) ironcitrate 1ml/支*5
1瓶 3T3-Swiss albino细胞株 3T3-Swiss albino 低温运输和保存
82个 陶瓷研钵 (直径60 mm) 常温
海藻糖酶测试盒可见分光光度法Phospho-FAK(Tyr407) 磷酸化粘着斑激抗体 规格: 0.1ml
CD28 CD28抗体 规格: 0.1ml
phospho-DAXX (Ser671) 磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体 规格: 0.1ml
SMC2 染色体结构维持蛋白2抗体 规格: 0.2ml
ACADM/MCAD 酰基辅A脱中链抗体 0.2ml
CaMK2a 钙/钙调素依赖蛋白激2α抗体 规格: 0.1ml
IL-17A 白介素-17抗体 规格: 0.1ml
phospho-E2F1 (Ser364) 磷酸化转录因子E2F-1抗体 规格: 0.1ml
SLC9A9 钠通道蛋白9家族A9抗体 规格: 0.2ml
AAT/Tryptase α-1抗胰蛋白抗体 0.1mlATF3 活化转录因子3抗体 规格: 0.2ml
Talin 踝蛋白抗体 规格: 0.1mlNNF1R/PMF1 多胺调控因子1抗体 规格: 0.2ml
CDK5RAP2 CDK5激活结合蛋白2抗体 规格: 0.2mlRibonuclease 6 核糖核酸6抗体 规格: 0.2ml
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