荧光及显色法，细胞样本

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仪器：
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为550nm）
2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理：
血清（浆）可直接测定。
红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.加温
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
优点如下：
1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD，0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
5、再现性好：变异系数CV=1.7%。
6、回收试验： X =103.3%。
7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳。
ESM1 Others Human 人 ESM1 / Endocan 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 苯磺酸氨氯地平（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Amlodipine Besylate

人脐静脉平滑肌细胞HUVSMC盐酸阿莫罗芬/盐酸阿莫洛芬 质量规格：≥99,BRAmorolfine

EB病毒转化的绒猴细胞;B95-8 膀胱癌细胞，J82细胞 GBC-SD(胆囊癌细胞)氟米质量规格：>99%,BRFlumethasone

EB病毒转化的人B细胞;HH-29氟米（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Flumethasone

SCARB2 Others Mouse 小鼠 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸利托君质量规格：>98%,BRRitodrine HCl
草鱼肾细胞;GIK顺铂（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Cisplatin

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 克拉曲滨,克拉利宾质量规格：>99.0%,USP34,BR,可用于细胞培养Cladribine

CL-0262BE(2)-M17(人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2西地尼布马来酸盐质量规格：度> 99%Cediranib Maleate

HCC细胞，高分化鳞癌细胞 人T瘤细胞Jurkat亚系,Jurkat77细胞 人癌细胞;MDA-MB-157西他列汀质量规格：>98.5%,BRSitagliptin

786-O(人肾透明细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2维达列汀;维格列汀质量规格：>98.5%,BRVildagliptin
CL-0091HBL-100(人整合SV40基因的上皮细胞)5×106cells/瓶×2补骨脂素（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Psoralen

小鼠骨髓细胞;FDC-P1 大鼠视网膜神经节细胞*培养基 100mL苍术素（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Atractylodin

PATU-8988/FU 人胰腺癌尿嘧啶耐药草乌甲素（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Bulleyaconitine A

SEMA6A Others Human 人 Semaphorin-6A / SEMA6A 人细胞裂解液 (阳性对照) 草质素(标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Herbacetin

团头鲂尾鳍细胞;WCF丙谷胺（标准品）质量规格：含量测定Proglumide
荧光及显色法，细胞样本人肾皮质上皮细胞RNAHRCEpiC miRNA5 μg拉莫三嗪 （标准品）Lamotrigine质量规格：HPLC>98%,标准品

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人细胞裂解液 (阳性对照) D-半乳糖醛酸D-Galacturonic acid质量规格：进分,97%,一水

新生牛眼Tenon's囊成纤维细胞;NBTFD-半乳糖醛酸(标准品)D-Galacturonic acid质量规格：UV法含量测定；一水物

HCT-15细胞，人结直肠腺癌细胞 人眼脉络色素瘤细胞,OCM-1细胞 人结直肠腺癌细胞;LoVo骨化三醇Calcitriol质量规格：度≥98%,BR

Hepa 1-6(小鼠肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2坎地沙坦酯Candesartan cilexetil质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养
实验通用规则：
1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的，要在临用前现配。