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甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒可见分光光度法

简要描述:甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒可见分光光度法公司正在出售的产品:LPM琼脂添加剂 英文名称:LPM Agar Additive 产品规格:1ml*5 FB1(Half-Fraser)添加剂 英文名称: 产品规格:5ml*2 FB1(Half-Fraser)添加剂(A、B) 英文名称:FB1 additive(A、B) 产品规格:2ml*40 血液琼脂基础 英文名称:Blood agar base

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-27
  • 访  问  量:541

详细介绍

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称:甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒可见分光光度法

产品规格:50管/48样

检测方法:可见分光光度法

产品货号:BK-01S6592

产品分类:三羧酸循环系列
商品介绍:

测定意义:

MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。

测定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

QQ截图20220307153537.png 

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

0.4mL dUTP溶液,100 mM dUTP Solution,100 mM -20℃保存

2 ug pLentiGuide-Puro pLentiGuide-Puro 低温运输,-20℃保存

改良LETHEEN琼脂基础 LETHEEN AGAR BASE, MODIFIED 250g

1瓶 MOLM-13细胞株 MOLM-13 低温运输和保存

LesEndo琼脂 m-Endo Agar,LES 250g

1g 阿利新蓝 8GX Alcian Blue8GX 室温干燥保存

100mL Transformation Buffer-2  Transformation Buffer-2  常温保存

30µL HRP标记内参抗体(β-actin)  

2 ug pTAL-Luc pTAL-Luc 低温运输,-20℃保存

25mg RNOligo(dT)纤维素  常温

2 ug pEGFP-Tub pEGFP-Tub 低温运输,-20℃保存

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒可见分光光度法KChIP2  钾通道相互作用蛋白2抗体 规格: 0.2ml

AGFG1  艾滋毒复制结合蛋白抗体 规格: 0.2ml

Phospho-FRAP1/mTOR(Ser2448)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗体 规格: 0.1ml

PDEF/SPDEF  上皮特异性ETs转录因子抗体 规格: 0.1ml

CCDC52  卷曲螺旋结构域蛋白52抗体 规格: 0.2ml

VCP  含缬酪肽蛋白抗体 规格: 0.1ml

FEN1  结构特异性核酸FEN1抗体 规格: 0.2ml

Brn-2  大脑蛋白2抗体 规格: 0.2ml

SIRT4/SIR 2 like protein 4  沉默调节相关蛋白4抗体 规格: 0.2ml

AAK1  AP2关联激1抗体 0.2ml

Caspase-1(actived P10)  天冬-胱特异性蛋白家族抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的小鼠抗大鼠IgG 规格: 0.1ml 

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

 


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