miRNA cDNA第一链合成试剂盒

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仪器：
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为550nm）
2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理：
血清（浆）可直接测定。
红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

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测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.加温
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
优点如下：
1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD，0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
5、再现性好：变异系数CV=1.7%。
6、回收试验： X =103.3%。
7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳。
NCI-H716(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 MDA-MB-231(癌细胞)氨苄西林/氨苄青霉素(标准品)质量规格：含量测定Ampicillin Trihydrate

CL-0424RK1(大鼠肾细胞)5×106cells/瓶×2阿替美唑盐酸盐质量规格：>99%,BRAtipamezole HCl

ICOSLG Others Human 人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿替美唑盐酸盐(标准品)质量规格：>98%,标准品Atipamezole HCl

人内根壳细胞RNAHHIRSC miRNA5 μg阿糖胞苷（标准品）质量规格：HPLC>99%,标准品Cytarabine

QBC939细胞，人胆管癌细胞 褐鼠瘤上皮细胞,RIN-m细胞 NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系达卡巴嗪质量规格：>98.5%,USP31,BR,可用于细胞培养Dacarbazine
RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-(4-甲氧苯基)-4,6-双(三氯) -1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2-(4-Methoxyphenyl)-4,6-bis(trichloromethyl)-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(GC)

恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]三苯基溴化锍(>98.0%(T))Triphenylsulfonium Bromide质量规格：>98.0%(T)

AFM Others Human 人 AFM / Afamin 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪6-Bromoimidazo[1,2-a]pyrazine质量规格：>98%

小肠平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)1,2-1,2-Propanediol质量规格：AR,分析

NCI-H209细胞，人小细胞肺癌 人癌抗雌激素耐药株,LCC9细胞 上皮细胞生长添加物MEpiCGSTBB(4,5,6,7-四溴-1H-苯并三唑)TBBT;NSC 231634质量规格：>98%,蛋白激酶抑制剂
人羊膜上皮细胞RNAHAmEpiC miRNA5 μg雌激素酮硫酸盐，去氢表雄酮硫酸钠质量规格：>98%Dehydroepiandrosterone-3-sulfate

SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照) 缬更昔洛韦盐酸盐 质量规格：>99%,USPValganciclovir

SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1肌醇质量规格：>99%,BRInositol

CL187/CCL187细胞，人大肠癌细胞 人色素瘤细胞,M14细胞 人多发性骨髓瘤细胞;RPMI-8226 [RPMI8826]肌醇(标准品)质量规格：>99%,标准品Inositol

Hela(人细胞) 5×106cells/瓶×24'-羟基氟比洛芬质量规格：美国进口4'-Hydroxy Flurbiprofen
miRNA cDNA第一链合成试剂盒HCMEC-c 人类心脏微血管内皮细胞(HCMEC) 500,000cells 脑静脉血管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)（标准品）Hydrocortisone质量规格：HPLC>98%,标准品

神经胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)富马酸伊布利特Ibutilide fumarate 质量规格：>99%,BR

SORCS1 Others Human 人 SORCS1 人细胞裂解液 (阳性对照) 富马酸伊布利特(标准品)Ibutilide fumarate 质量规格：HPLC≥98%,标准品

Oregon vole 俄勒冈地鼠硫酸异帕米星Isepamicine Sulphate质量规格：含量≥670µg/mg

猪肾细胞;PK(15)蓓萨罗丁;贝沙罗汀Bexarotene质量规格：>99%
实验通用规则：
1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的，要在临用前现配。