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ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒微量法

简要描述:ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒微量法公司正在出售的产品:麦康凯琼脂 英文名称:Maconkey Agar 产品规格:250g 碱性琼脂平板 英文名称:Alkaline Agar 产品规格:250g 碱性胆盐琼脂 英文名称: 产品规格:250g PLET琼脂基础 英文名称:PLET Agar Base 产品规格:250g

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-27
  • 访  问  量:620

详细介绍

商品介绍:

测定意义:

ACLEC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的关键酶,其催化产生的乙酰可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。

测定原理:

ACLATP和存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算ACL活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,38个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒微量法

100管/96样

微量法

BK-01S6663

11.png 

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约2615个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

125mL PIPES Lysis Buffer with Triton,2X  PIPES Lysis Buffer with Triton,2X  常温保存

1mL 溶液,50mg/mL Carbenicillin Disodium Salt -20℃避光保存

肠道菌富集肉汤培养基(USP) Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel 250g

50mL ABTS 溶液,7mM  ABTS Solution -20℃避光保存

2 ug pZL507 pZL507 低温运输,-20℃保存

5次 一步法97孔板单菌落质粒DNAout(离心法) One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常温

2 ug pET-48b(+) pET-48b(+) 低温运输,-20℃保存

金氏B培养基管  5ml*20支

1瓶 A9细胞株 A9 低温运输和保存

GN增菌液颗粒 Gram Negative Enrichment Broth 250g

100µg 人基因组DNA,男性 Human Genomic DNA 4℃保存

ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒微量法TCF12/HEB  转录因子12抗体 规格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗人IgM 规格: 0.1ml

BCL7C  B细胞白/蛋白7抗体 规格: 0.2ml

phospho-c-Raf(Ser43)  磷酸化原基因c-Raf抗体 规格: 0.1ml

ARH/LDL receptor adaptor protein  脂蛋白受体衔接蛋白抗体 规格: 0.2ml

FGF13  纤维母细胞生因子13抗体 规格: 0.2ml

CD7  CD7抗体 规格: 0.1ml

phospho-PAK1(Ser144)  磷酸化p21激活激1抗体 规格: 0.1ml

Gelsolin  凝溶胶蛋白抗体 规格: 0.1ml

SDF-1/CXCL12  基质细胞衍生因子1抗体 规格: 0.1ml

Wnt8A  信号通路WNT8A抗体 规格: 0.2ml

E. coli LPS  大肠杆菌脂多糖抗体 规格: 0.2ml

 


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