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磷脂酶A2(PLA2)测试盒微量法

简要描述:实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-12-27
  • 访  问  量:565

详细介绍

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,04个工作日出结果,提供原始数据!

产品名称

规格

检测方法

货号

磷脂酶A2(PLA2)测试盒微量法

100管/48样

微量法

BK-01S6659

商品介绍:

测定意义:

磷脂酶A2EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中,参与脂肪消化,精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程,在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

测定原理

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸(HEPC)产生游离巯基,与DTNB反应生成黄色物质,在412nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、超速冷冻离心机、研钵、可见分光光度计、微量石英比色皿。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约3064个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

2 ug pcDNA3.1(hyg)+ pcDNA3.1(hyg)+ 低温运输,-20℃保存

马铃薯琼脂培养基 Potato Agar Medium 250g

100g 麦芽提取物 Malt Extract 室温保存

50T 脑膜炎病毒多重PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

100 mg 5(6)-CFDA Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

100mL Bis-Tris Buffer,0.2M,pH7.0   Bis-Tris Buffer,0.2M,pH7.0   常温保存

20次 Southern Marker DL2000(DIG)  

2 ug pGEX-6P-2 pGEX-6P-2 低温运输,-20℃保存

美国药典培养基(USP标准)  

1瓶 H4-II-E-C3细胞株 H4-II-E-C3 低温运输和保存

TSA表面接触皿55mm  2694个每包

磷脂酶A2(PLA2)测试盒微量法Acetyl-Histone H4(K12)  乙酰化组蛋白H4抗体 规格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/APC  APC标记的兔抗马IgM 规格: 0.1ml

PHLDA1/TDAG51  T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1ml

Phospho-NMDAR2B (Tyr1070)  磷酸化谷受体2B抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的小鼠抗羊IgG 规格: 0.1ml

CRYZL1  醌氧化还原样蛋白1抗体 规格: 0.2mlPAR-2  蛋白激活受体-2抗体 规格: 0.1ml

p22-phox/Cytochrome b245 Light Chain  细胞色素b245轻链抗体 规格: 0.1mlPhospho-HP1(Tyr43)  异染色质蛋白1磷酸化抗体(果蝇) 规格: 1ml

Clathrin heavy chain/Clathrin HC  网格蛋白重链抗体 0.2mlSNX27  SNX27蛋白抗体 规格: 0.2ml

HMGCR  三羟基三甲基辅A还原抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.1ml

BMPER  BMP内皮细胞调节蛋白抗体 规格: 0.2mlCCDC83  卷曲螺旋结构域蛋白83抗体 规格: 0.2ml

IgHV/IgH  免疫球蛋白重链可变区抗体 0.2mlphospho-IRS1(Ser312)  磷酸化胰岛素受体底物-1抗体 规格: 0.1ml

CYP27A1  27α羟化抗体 规格: 0.2mlMLF1 Interacting Protein/PBIP1/KLIP  卡波西氏肉瘤疱疹毒潜伏核抗原相互作用蛋白1抗体 规格: 0.1ml

AAT1/C3orf15  3号染色体开放阅读框15抗体 规格: 0.2mlNCX2/SLC8A2  钠钙交换蛋白2抗体 规格: 0.1ml

POLA2  DNA聚合α2抗体 规格: 0.2mlHAVCR1/TIM1  损伤分子1抗体(甲型毒细胞受体1) 规格: 0.1ml

 


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