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注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:超氧阴离子清除能力测试盒微量法
产品规格:100管/96样
检测方法:微量法
产品货号:BK-01S6460
产品分类:氧化与抗氧化系列
商品介绍:
测定意义: 超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基,可攻击生物大分子,如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等,使其交链或者断裂,引起细胞结构和功能的破坏,与机体衰老和病变有很密切的关系,清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。 测定原理: AP-TEMED系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-与对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。 自备实验用品及仪器: 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
溴甲紫葡萄糖肉汤 Bromcresol Purple Dextrose Broth 250g
1瓶 CBRH-7919细胞株 CBRH-7919 低温运输和保存
麦康凯肉汤USP颗粒 MacConkey Broth Medium 250g
1套 一站式PCR-SSCP套装 One-Stop PCR-SSCP Pack 除PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存外,其余成分可以保存
500mL MOPS Buffered Saline,5X,pH7.2 MOPS Buffered Saline,5X,pH7.2 常温保存
50次 加A试剂盒 dA Tailing Kit -20℃保存
2 ug pMIG pMIG 低温运输,-20℃保存
牛心浸粉 Beef Heart Infusion 100g
2 ug pAdTrack-polyA pAdTrack-polyA 低温运输,-20℃保存
盐缓冲液(pH7.2) PBS broth 250g
250mL 二甲基二氯硅烷 Dimethyldichlorosilane 室温干燥保存
超氧阴离子清除能力测试盒微量法HPV33 E6 人类状瘤毒33抗体 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的羊抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml
Ghrelin 28 脑肠肽抗体 规格: 0.1ml
CIRBP 冷诱导RNA结合蛋白抗体 规格: 0.2ml
KCNC3/Kv3.3 离子通道蛋白Kv3.3抗体 规格: 0.2ml
KCNMB1/Maxi Potassium channel beta 钙激活钾通道蛋白β1抗体 规格: 0.2ml
TRIB2 MAPK调控蛋白TRB2抗体 规格: 0.2ml
NT5C1A 胞质5'核苷酸1A抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Gold 胶体金标记的兔抗猪IgG 规格: 0.5ml
Bad 相关死亡促进因子Bad抗体 规格: 0.1ml
NFkB p100/p52 细胞核因子p100/p52k基因结合核因子抗体 规格: 0.1ml
EDNRA 内皮素受体A抗体 规格: 0.1ml
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