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实验方法学：
一、肝素的配制：
市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集：
全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。
产品名称：线粒体活性氧产生速率（ROS）测试盒荧光法
产品规格：100管/96样
检测方法：荧光法
产品货号：BK-01S6410
产品分类：氧化与抗氧化系列
商品介绍：
测定意义: 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，研究表明，机体95％以上的活性氧（ROS）都来自于线粒体，其失衡所致的氧化应激与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程有关。 正常情况下，细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态，细胞内活性氧（ROS）水平维持在较低的生理范围；在病理情况下，细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破，细胞内活性氧水平过多，就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸，使机体出现氧化应激，同时，活性氧还可攻击线粒体DNA产生氧化损伤，导致线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位破坏等结构和功能变化。 因此，通过检测活性氧的变化来判断线粒体的功能是否正常具有重要意义。 测定原理： 荧光探针-还原型二氯荧光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜，在线粒体内被酯酶水解，形成无荧光的DCFH，DCFH迅速与ROS反应生成荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根据上述原理设计了利用荧光法直接定量检测线粒体ROS产生速率的方法。将荧光强度随时间变化的数据点拟合，线性回归直线斜率与ROS产生的速率呈正比。 需自备的仪器和用品： 多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本： 取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10 4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。 |
注意事项：
1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μl试剂二原液+60μl蒸馏水）。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是（1）试剂二或试剂四没有现配现用；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
100mL PEG-TE-LiAc Solution PEG-TE-LiAc Solution 常温保存
0.1mL×10 SURE化学感受态细胞 SURE Competent Cell -80℃保存
2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低温运输，-20℃保存
B5培养基（不含琼脂和蔗糖） B5 Medium(without agar or sucrose) 250g
2 ug pC-YFP pC-YFP 低温运输，-20℃保存
100U PreScissiom 蛋白 PreScissiom Protease -20℃保存
2 ug p53Blue p53Blue 低温运输，-20℃保存
萘啶酮酸(4.0mg) Nalidixic Acid 4.0mg*5
1g Xanthine 室温干燥保存
1000支 0.5 mL RNase-free 离心管 常温
50 T 过氧化氢测试盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存
线粒体活性氧产生速率（ROS）测试盒荧光法Hemopexin/HPX 糖蛋白β-1B抗体 规格: 0.1mlRNF35 环指蛋白35抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-chicken IgM/Cy3 Cy3标记的兔抗鸡IgM 规格: 0.1mlCatalase 过氧化抗体 规格: 0.2ml
ADAMTS2 整合素样金属蛋白与凝2型抗体 0.2mlfactor XIII 凝因子13抗体(纤维蛋白稳定因子) 规格: 0.2ml
Transferrin(1F10) 转铁蛋白单克隆抗体 规格: 0.1ml
SERPINB12 丝蛋白抑制剂B12抗体 规格: 0.2ml
Granzyme D/B/E/N/G/F/H 颗粒D/B/E/N/G/F/H抗体 规格: 0.1ml
Emerin Emerin蛋白抗体 规格: 0.1ml
WIG-1/PAG608 野生型P53诱导基因1抗体 0.1ml
APLP2 淀粉样蛋白β前体样蛋白2抗体 规格: 0.2ml
MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus) 多药耐药蛋白/P-糖蛋白抗体(C端) 规格: 0.1ml
TSP50 瘤/睾抗原20抗体 规格: 0.2ml
Phospho-Histone H2A.X (Tyr143) 磷酸化组蛋白H2AX抗体 规格: 0.1ml
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