总三磷酸腺苷水解酶T-ATPase活性测定试剂盒

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仪器：
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为550nm）
2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理：
血清（浆）可直接测定。
红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

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测定步骤：
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.加温
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
优点如下：
1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD，0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
5、再现性好：变异系数CV=1.7%。
6、回收试验： X =103.3%。
7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳。
人结直肠腺癌细胞;HCT 116 [HCT116]二录化铜，英文名或英文缩写：Copric chloride dihydrate，级别：CP，98.5%，规格：1克

人成纤维母细胞-胎儿(HDF-f)( 5×105 )溴化鳞(III) tribromidq 7789-60-8

RN-s, 大鼠纹状体神经元录雷他定 Lorctcdinq; 79794-72-2

人T瘤细胞Jurkat亚系;Jurkat77 大鼠肾成纤维细胞*培养基 100mLCASPASE-3INHIBITORVIICASPASE-3 抑制剂 VII5MGCLD PL-COLD

P815 小鼠肥大细胞癌细胞N-芴甲氧羰酰基-D-蛋酸(甲)NA
人膀胱癌细胞;5637(HTB-9)四本基硼酸钠，英文名或英文缩写：NaTBP，级别：CP，95%，规格：1毫升

SPP1 Others Human 人 OPN / SPP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 猪胆盐 Bilq sclt,pig 800-0625446

SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-11-十六醇，英文名或英文缩写：1-Hexadecanol，级别：AR，99%，规格：100克

SIGLEC6 Others Human 人 SIGLEC6 / CD327 人细胞裂解液 (阳性对照) L-赖酸乙酯100克

外周血白细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Peptone 500g原装 OXOID
F7 Others Human 人 F7 / Coagulation Factor VII 人细胞裂解液 (阳性对照) 肉豆蔻(标准品)Myristicin质量规格：HPLC≥95%，标准品

NIH3T3 小鼠胚胎成纤维细胞卡枯醇Kakuol质量规格：HPLC≥98%，标准品

猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞;RF/6AL-细辛脂素(标准品)L-Asarinin质量规格：HPLC≥98%，标准品

HNE2, 人鼻咽癌细胞系吉托皂苷元(标准品)Gitogenin质量规格：HPLC≥98%，标准品

人Butt瘤细胞;RAJI 大鼠气管和支气管上皮细胞*培养基 100mL异甘草素Isoliquiritigenin质量规格：≥98%,甘草提取
总三磷酸腺苷水解酶T-ATPase活性测定试剂盒SPP1 Others Human 人 OPN / SPP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 1酸氢铵钠(>98%,BR)质量规格：>98%,BRAmmonium  phosphate

SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1丁二酸铵(>98%,BR)质量规格：>98%,BRAmmonium succinate

SIGLEC6 Others Human 人 SIGLEC6 / CD327 人细胞裂解液 (阳性对照) 芍药苷(98%)质量规格：>98%，高含量易分解Paeoniflorin

外周血白细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)5-羟基色氨酸,5-HTP质量规格：≥98.0%,BR,L构型5-Hydroxytryptophan

ERA-2细胞，人恶性多发性畸胎瘤细胞 人癌阿霉素耐药细胞株,MCF/Adr细胞 台盼蓝TB5-羟基色氨酸(标准品)质量规格：≥98.0%,标准品,L构型5-HTP
实验通用规则：
1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的，要在临用前现配。