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实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称:甲醛脱氢酶(FDH)测试盒紫外分光光度法
产品规格:50管/48样
检测方法:紫外分光光度法
产品货号:BK-01S6346
产品分类:辅酶Ⅰ系列
商品介绍:
测定意义: 甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物,对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶(ADH)的家庭成员之一,广泛存在于原核和真核生物中,该酶能利用NAD+作为辅酶,将有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途径中的关键酶。 测定原理 甲醛脱氢酶催化甲醛和NAD+产生NADH,在340nm处的吸光值会增加,测定340nm处的吸光值变化,可计算得到甲醛脱氢酶的活性。 自备实验用品及仪器 天平、离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
| ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10 4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 |
注意事项:
1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
500mL Blotto in TBS Blotto in TBS 常温保存
1g 分子生物学级糖原干粉 Glycogen Powder 常温
2 ug pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] 低温运输,-20℃保存
煌绿琼脂培养基 Brilliant Green Agar Medium 250g
1瓶 HCCLM3细胞株 HCCLM3 低温运输和保存
10次 百万碱基级真菌DNAout
500U Tth 核酸内切 IV Tth Endonuclease IV -20℃保存
250mL RIPA Buffer—2 RIPA Buffer—2 常温保存
1 管 DH10B大肠杆菌 DH10B E.coli Strain -80℃保存
2 ug pREV pREV 低温运输,-20℃保存
O157菌成套生化鉴定管 11种*1套/盒*10盒
甲醛脱氢酶(FDH)测试盒紫外分光光度法FMDV Polyprotein (3A protein) 口蹄疫毒A型抗体 规格: 0.2mlphospho-MAPK14(Tyr323) 磷酸化p38MAPK抗体 规格: 0.1ml
TET1/CXXC6 Ten-eleven转运基因1蛋白抗体 规格: 0.2mlNRP1/CD304 神经纤毛蛋白1抗体 规格: 0.1ml
MIP4/CCL18 巨噬细胞症蛋白18抗体 规格: 0.1mlDNase gamma 脱氧核糖核酸γ抗体 规格: 0.2ml
MRF/C11orf9 髓鞘基因调控因子抗体 规格: 0.2mlMYBBP1A/p53 activated protein 2 p53激活蛋白2抗体 规格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的羊抗小鼠IgG 规格: 0.1mlRabbit Anti-Avidin 兔抗亲和素 规格: 1mg
PGF2 α 前列素F2a抗体 规格: 0.2mlalpha 2 Macroglobulin α2巨球蛋白(α-2M)抗体 规格: 0.2ml
phospho-KLF5(Ser275) 磷酸化KLF5抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/PE PE标记的小鼠抗牛IgG 规格: 0.1ml
SFR19 剪接因子,/丝丰富19 规格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47) 磷酸化核基质结合区结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml
APOC2 载脂蛋白C2抗体 规格: 0.1mlAPEX2 嘌呤嘧啶核酸内切2抗体 规格: 0.1ml
MAP3K2/MEKK2 丝裂原活化蛋白激激2抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的驴抗人IgG 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy3 Cy3标记的兔抗小鼠IgG-Fc 规格: 0.1mlCDC3/CDC10/Septin 7 细胞周期调控因子3抗体 规格: 0.2ml
CD1A T淋巴细胞CD1A抗体 规格: 0.1mlPhospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受体抗体 规格: 0.1ml
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