大鼠肝星形细胞

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

实验操作步骤：  
a．采用认可的方案处死啮齿动物。    
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。  
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。   
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml灭菌烧杯363个； 
3、50ml离心筒363个 
4、灭菌培养皿93个，细胞培养瓶93个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒363个；无菌玻璃搅拌棒93个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台；
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

细胞冻存：
对培养的细胞进行冻存的最佳方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的*培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点，并可减缓冷却速度吗，大大降低冰晶形成的危险  (冰晶可损伤细胞，导致细胞死亡)。
注：DMSO 可促进有机分子进入组织。操作含DMSO的试剂时，应采用与此类物质安全危害相适应的设备和操作规范，并应按照当地法规处置此类试剂。 
细胞冻存指导原则
冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。与其他细胞培养操作一样，我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得最佳结果。 
1）在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意最佳冻存条件取决于所用细胞系。 
2）细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。
3）必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂
4）将冷冻的细胞于 -70°C 以下温度储存；温度高于 -50°C 时，冷冻的细胞将开始变质。 
5）必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存 
6）必须穿戴个人防护设备。 
7）所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。
ADORA2B 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
ALS2CR1 肌侧索硬化症相关蛋白1抗体
APBA2 β淀粉样前体蛋白结合蛋白2抗体（X11β）
Diazepam Binding Inhibitor 乙酰辅酶A结合蛋白抗体
phospho-CDC16(Ser560) 磷酸化细胞分裂周期蛋白16抗体
AHI1 白血病相关蛋白AHI1抗体
AICDA 活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶抗体
ABCA9 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白9抗体
ARF3 ADP核糖基化因子3抗体
AARSD1 含丙氨酰tRNA合成酶结构域1抗体
AMIGO1 粘附分子IgG样结构域蛋白1抗体
KAL1 卡尔曼综合症基因1抗体
ASB7 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族7抗体
ASB17 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族17抗体
ASB12 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族12抗体
ATPase Na+/ K+ beta 2 钠钾ATP酶通道蛋白抗体
AGXT2L2 AGXT2L2蛋白抗体
ANKS1B β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体
ANKS6 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白6抗体
ART3 二磷酸腺苷核糖基转移酶3抗体
ART5 二磷酸腺苷核糖基转移酶5抗体
AMPD1 腺苷单磷酸脱氨酶1抗体
Ankyrin erythroid 红细胞蛋白Ank1抗体
Adenylosuccinate Lyase 腺苷酸琥珀酸裂解酶抗体
A1BG α1B糖蛋白抗体
A1CF 载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体
AIFM3 凋亡诱导因子3抗体
Apaf1 Interacting Protein 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗体
APPD 凋亡诱导蛋白D抗体
Acid sphingomyelinase 酸性神经鞘磷脂酶抗体
ANT-1 腺嘌呤核苷酸转运蛋白1抗体
ALS2CR8 肌侧索硬化2染色体区域候选蛋白8抗体
ATP6IP2 ATP酶H+转运溶酶体辅助蛋白2抗体
Azurocidin 肝素结合蛋白/阳离子抗菌蛋白37/天青杀素抗体
Alpha-Synuclein 核突触蛋白抗体
beta-Actin (Loading Control) β-肌动蛋白/β-Actin 抗体（内参抗体）
beta-Amyloid 1-42 (CT) β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体
beta Amyloid 1-16 β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体
beta Amyloid 1-28 β淀粉样肽1-28/β-Amyloid 1-28抗体
ARIP2a 激活素受体2A抗体
Aquaporin 5 水通道蛋白5抗体
beta Amyloid 1-40 β淀粉样肽（1-40）抗体
beta Amyloid 1-42 β淀粉样肽（1-42）抗体
APOA1 载脂蛋白A1抗体
Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗体
小鼠载脂蛋白B100(Apo B100)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo B100 ELISA Kit
小鼠载脂蛋白B(ApoB)ELISA试剂盒 ，英文名： ApoB ELISA Kit
小鼠载脂蛋白A5(apo-A5)ELISA试剂盒 ，英文名： apo-A5 ELISA Kit
小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 ，英文名： apo-A1 ELISA Kit
小鼠载脂蛋白A1(Apo A1)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo A1 ELISA Kit
小鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 ，英文名： PROGR ELISA Kit
小鼠孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit
小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit
小鼠诱导型一氧化合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： iNOS ELISA Kit
小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： iNOS ELISA Kit
小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒 ，英文名： FFA ELISA Kit
小鼠游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒 ，英文名： Free-T3 ELISA Kit
小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒 ，英文名： FT4 ELISA Kit
小鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA试剂盒 ，英文名： F-TESTO ELISA Kit
小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： Hp-IgG ELISA Kit
小鼠印度刺猬因子(IHH)ELISA试剂盒 ，英文名： IHH ELISA Kit
大鼠肝星形细胞小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)ELISA试剂盒 ，英文名： IDO1 ELISA Kit
小鼠音猬因子N端(Shh-N)ELISA试剂盒 ，英文名： Shh-N ELISA Kit
实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%麻醉，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除血管外部的洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将血管纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的血管，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 84个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。