反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免68个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
α1酸性糖蛋白2抗体(类粘蛋白2)
磷酸化水通道蛋白2抗体
抗利尿激素/血管升压素/加压素/血管加压素抗体
ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体
醛糖还原酶抗体
人血清白蛋白抗体
活化转录因子4抗体
腺苷酸激酶-1抗体
纤维状肌动蛋白抗体
聚集蛋白抗体
调亡诱导因子抗体
调亡诱导因子抗体
间变型淋巴瘤激酶抗体
膜粘连蛋白A1抗体
自噬相关蛋白1抗体
β淀粉样肽1-16/Aβ1-16 抗体
衔接因子蛋白含pH域蛋白1抗体
水通道蛋白-7抗体
p21活化蛋白激酶ARHG7抗体
磷酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体
2-氨基乙硫醇双加氧酶抗体
血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体
腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
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